bcr-abl基因免疫诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能

目的研究bcr-abl融合基因免疫在慢性髓系白血病(chronic mye logenous leukemia CML)中的作用以及探讨CML基因免疫治疗的可行性. 方法设计两条引物扩增bcr-abl融合位点两侧约490 bp大小的cDNA,经测序鉴定正确后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1,通过电穿孔法转染至p815细胞,应用G418筛选建立稳定的靶细胞,同时将重组真核表达载体肌肉免疫BALB/c小鼠以获取特异的效应细胞,乳酸脱氢酶(LDH)法检测特异性杀伤率. 结果①PCR扩增出可用于基因免疫的位于bcr-abl融合基因位点两侧的490 bp大小的cDNA,序列测定除第452位碱基C突变为T外其余序列均正确;②构建了重组真核高效表达载体,命名为pcDNA/bcr-abl;③G418梯度筛选建立了稳定表达该融合基因的细胞系,逆转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)检测到该细胞系有bcr-abl mRNA水平的表达;④bcr-abl基因免疫后的小鼠能有效诱导出特异性细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphcyte, CTL). 结论位于融合位点两侧的bcr-abl基因肌肉免疫小鼠能够诱导特异性CTL,杀伤bcr-abl融合基因转染的靶细胞.