苦豆子cDNA文库的构建

Journal of Xinjiang Agricultural University（2004）

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摘要

以产于新疆豆科碟形花亚科槐属植物苦豆子(Sophora alopecuroides.L)幼苗为材料,用改进的一步抽提法提取了总RNA,再以生物素标记的Oligo(dT)为引物,经过磁性球珠法,分离出mRNA,反转录酶催化合成cDNA.与EcoRI Adaptor连接,再经Septacryl S-400分级,磷酸化后将双链cDNA克隆于λgt11载体中,经体外包装和感染Y1090菌株,成功构建了效价为0.9×106 pfu·ml-1苦豆子幼苗cDNA文库.随机挑选5个重组噬斑,PCR法检查出重组克隆的插入片段平均大于1 000 bp,说明cDNA文库质量较高.

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