野生型及羧基端缺失突变HBx对肝癌细胞增殖的影响

目的 明确氨基端或羧基端缺失突变50个氨基酸的HBx对肝癌细胞增殖的影响及可能机制.方法 PCR法分别扩增氨基端、羧基端缺失50个氨基酸的HBx基因片段( HBxn、HBxc ) ,并定向插入绿色荧光蛋白( GFP)真核表达载体pEGFP-C1以构建重组体pGFP-HBxn及pGFP-HBxc. 脂质体转染法将重组体转染HepG2细胞,用G418筛选,荧光显微镜下观察. RT-PCR鉴定稳定表达GFP-HBxn、GFP-HBxc融合蛋白的HepG2细胞系. MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p16的表达. 结果 RT-PCR检测示 HepG2/GFP -HBxn、HepG2/GFP -HBxc 细胞分别有 HBxn、HBxc 的转录和表达. MTT 法检测示HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-HBxc细胞的增殖速度明显快于HepG2、HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBxn细胞(P<0.05). 流式细胞术检测示HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-HBxc细胞的G0/G1 期百分比较HepG2、HepG2/GFP细胞明显减少(P<0.05),而 HepG2/GFP-HBxn细胞与 HepG2、HepG2/GFP 细胞比较差异无统计学意义.Western blots 显示HepG2/GFP-HBx、HepG2/GFP-HBxc细胞的P16表达量明显低于HepG2、HepG2 /GFP 细胞, HepG2/GFP-HBxn细胞P16的表达水平与HepG2、HepG2/GFP细胞无明显差异. 结论 HBx及羧基端缺失突变50个氨基酸的HBx能促进肝癌细胞的增殖,其作用可能是通过抑制抑癌基因p16表达而调控细胞周期进而促进肝癌细胞的增殖所致;HBx氨基端可能是HBx调控细胞周期及促进肝癌增殖的重要功能区域.