基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估

建立并评估分别检测戊型肝炎(戊肝)病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA.以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原,建立戊肝捕获法IgM ELISA(E2-IgM)和间接法IgG ELISA(E2-IgG).利用29只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性,并与商品化试剂(Genelabs公司抗-HEV IgG和IgM试剂,GL-IgG/GL-IgM)进行比较.29只恒河猴E2-IgM和E2-IgG的阳转率均为100%,其中75%在感染后4周内阳转,均早于ALT异常时间.E2-IgM持续2～14周,平均6周;E2-IgG在70周时仍无一阴转.GL-IgG阳转率为79.3%(23/29),多数晚于ALT异常时间,平均持续约18周,但最长为1只在感染后70周时仍为阳性.用E2-IgM试剂盒检测928份正常人血清,仅2份OD值略高于0.2.检测510份临床急性肝炎血清,可明显将其区分为2个部分,一个部分OD值小于0.2,其OD值分布与正常人相似;另一个部分OD值大于0.4,共131份,其中109份大于1.0.可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者.119份非甲～丙急性肝炎中,E2-IgM阳性57份,GL-IgM阳性29份(E2-IgM均阳性).5 060份普通人群血清的E2-IgG OD值在0.2以下,形成一个近似对数正态峰,均值为0.022,在OD值0.4以上则分布均匀.用E2-IgG试剂检测200份临床急性肝炎血清,结果OD值0.2以下也形成一个与普通人群类似的近似对数正态峰,但OD值在大于1.0～4.0间形成另一个尖峰(峰值在OD2.5处),其中多数E2-IgM阳性.抗-HEV单抗可明显阻断E2-IgM及E2-IgG,单抗Fab段的阻断效果与完整抗体类似,提示这种阻断是表位特异的.建立的戊肝IgM试剂和IgG试剂具有良好的敏感性与特异性.IgM试剂适用于临床戊肝诊断,IgG试剂适用于既往戊肝感染诊断.