人和猪软骨细胞aggrecan球间区域基因的克隆和同源性分析

目的分析人和猪软骨细胞 aggrecan球间区域( interglobular domain, IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义.方法通过 RT-PCR扩增人和猪软骨细胞 aggrecan IGD片段,将纯化的 RT-PCR产物克隆入 T 载体,通过测序、软件分析及 Northern杂交,比较二者基因和氨基酸序列的同源性.结果人和猪 aggrecan IGD cDNA有 84%的同源性.经 PSI-BLAST(Position Specific Iterated BLAST)分析,相关的氨基酸序列的同源性也达到 84%,表明其在进化过程中高度保守. Northern杂交可见,人和猪的 aggrecan IGD探针对猪总 RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带. 结论猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型,对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的 aggrecan水解反应进行深入的探讨,为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据.