采用基因拼接方法构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库

目的构建人源特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab噬菌体抗体库.方法从抗乙型肝炎病毒表面抗体高滴度(1:1024)的人全血中分离外周血单个核细胞(PBMC),经RT-PCR分别扩增出轻链可变区和重链可变区,再以噬菌体质粒为模板分别扩增出轻链恒定区(Cκ)和重链恒定区(CH1),将轻链可变区和轻链恒定区(Cκ)及重链可变区和重链恒定区(CH1)进行第1次基因拼接,分别形成κ轻链和Fd重链,再以κ轻链和Fd重链作为模板进行第2次基因拼接,形成完整的Fab基因,与pComb3H-SS噬菌体质粒连接后,电穿孔转化大肠杆菌XL1-Blue.结果通过多次电穿孔转化,获得总容量为4×105库容的噬菌体抗体库.结论构建的Fab抗体库可用于筛选特异性抗乙型肝炎病毒表面抗原Fab抗体分子.