人肠三叶因子在pET系统中的表达、纯化及生物活性

目的 构建人肠三叶因子(hITF)原核表达载体,表达重组hITF,并考察其生物学活性.方法 通过RT-PCR获得hITF cDNA片段,将目的基因插入原核表达载体pET32a,得到重组载体pET32a-hITF,优化表达条件获得最大表达产量,Ni-NTA亲和层析一步法纯化重组蛋白,SDS-PAGE、Western blotting及N端测序鉴定重组蛋白,细胞重建模型验证其功能.结果 经PCR及测序证实,hITF cDNA准确插入原核表达载体pET32a中,诱导表达后,SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为32kD,Western blotting分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性;N端15个氨基酸测序证明其序列正确性;体外实验证实其具有细胞促迁移能力.结论 成功构建出原核表达载体pET32a-hITF,获得重组hITF.