15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1/2活性的影响

目的 从细胞分子水平上研究15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetretraenoic acid,15-KETE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞上ERK1/2的活性的影响.方法 通过酶法分离、培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterialsmooth cells,PASMCs),使用Western blot技术观察15-KETE对大鼠PASMCs上ERK1/2活性的影响.结果 1)10-6mol/L 15-KETE作用从0.5h到24 h与对照组(未加15-KETE)比较,对ERK1/2总量没有明显的影响.2)与对照组比较,15-KETE处理0.5、1.0、2.0、4.0、8.0h明显增强p-ERK1/2(P ＜0.05).3)与对照组比较,10-8、10-7和10-6mol/L 15-KETE明显增强p-ERK1/2(P＜0.05),随15-KETE浓度增大,p-ERK1/2增多.4)与15-KETE作用比较,ERK1/2抑制剂PD98059 20 μmol/L、50 μmol/L和U0126 0.1μmol/L、1μmol/L均能抑制15-KETE对ERK1/2的活化(P＜0.05),并且随着抑制剂浓度增大,抑制作用加强.结论 15-KETE对大鼠肺动脉血管平滑肌细胞上的ERK1/2表达没有明显的影响,但能激活肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2,使其磷酸化,并呈时间-剂量依赖关系.ERK1/2通路的特异性抑制剂PD98059、U0126能抑制15-KETE对ERK1/2的磷酸化.