为有效利用SSR-PCR技术对药用植物苦参进行遗传多样性分析,采用正交设计L16（45）对影响苦参SSRPCR体系的5个因素（Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,PCR结果用"/>
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药用植物苦参SSR-PCR体系的优化与验证

DUAN Yong-hong,QU Yun-fang,WANG Chang-biao,BI Hong-yuan,WANG Yu-qing,SUN Yi,YANG Wu-de

Journal of China Agricultural University（2014）

Cited 3|Views2
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Abstract
为有效利用SSR-PCR技术对药用植物苦参进行遗传多样性分析,采用正交设计L16（45）对影响苦参SSRPCR体系的5个因素（Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,PCR结果用DPS数据处理软件分析,筛选出各因素的最佳水平,建立适宜苦参SSR-PCR的反应体系和扩增程序,并选用内蒙古苦参对该体系进行稳定性验证。结果表明:在10μL的苦参SSR-PCR体系中,模板DNA的用量为20.0ng,Taq DNA聚合酶的用量为0.20.6U,Mg2+的浓度为2.5mmol/L,dNTPs浓度为0.1mmol/L,引物的浓度为0.6μmol/L。扩增程序为:94℃预变性3min;94℃变性1min,56℃退火45s,72℃1min,35个循环;72℃延伸10min。4℃保存。选用12份苦参DNA对该体系进行稳定性验证,该体系具有较高的扩增稳定性,可用于药用植物苦参SSR标记的研究。
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orthogonal design,Sophora flavescens,optimization,SSR
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