苏禽黄鸡CVH基因真核表达载体构建及亚细胞定位

本研究通过PCR技术克隆苏禽黄鸡CVH基因的CDS区,分别构建真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,并用pcDNA3.1-CVH载体免疫小鼠制备多克隆抗体.pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH分别转染COS-7细胞,进行间接免疫荧光实验和CVH-EGFP融合蛋白亚细胞定位,并通过RT-PCR、Western blot进一步检测蛋白的表达.结果表明:克隆出CVH基因的完整CDS,构建了真核表达载体pcDNA3.1-CVH和pEGFP-C1-CVH,成功制备了多克隆抗体,转染后观察CVH基因表达产物定位于细胞质中,RT-PCR和Western bolt分别检测到1 989 bp特异条带和100 ku的融合蛋白.真核表达载体制备的多克隆抗体特异性良好,效价为1∶200,CVH基因蛋白在细胞质中表达,为进一步探讨CVH基因的生物学特性建立基础.