抗CD71人-鼠嵌合抗体的制备及其诱导肿瘤细胞凋亡

目的:研究在液氮中冻存2年的转染瘤细胞株(D2C)复苏后其分泌抗CD71人-鼠嵌合抗体的特异性、分泌量及诱导肿瘤细胞凋亡的效应.方法:用ELISA方法检测转染瘤细胞培养上清的抗体分泌量.经DEAE-Sephdex A-50离子交换法纯化产生的抗体,并采用SDSPAGE电泳鉴定;台盼蓝拒染法观察其对K562细胞生存的影响;细胞计数和MTT试验测定嵌合抗体及鼠源性抗体对K562细胞的作用;琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察K562细胞凋亡.结果:Balb/c裸鼠腹腔接种转染瘤细胞后,每只裸鼠腹水量在3～5mL.抗体经纯化,产量约为1～2 mg/mL腹水.经SDS-PAGE电泳鉴定,在分子量55 kD和27 kD处,可见有抗体IgG重链和轻链的染色条带.抗CD71嵌合抗体及鼠源性抗CD71抗体均可抑制K562细胞的增殖作用,且二者抑制作用无显著性差异(P＞0.05).经琼脂糖凝胶电泳和透射电镜观察分别可见抗体诱导的K562细胞DNA梯形条带和细胞凋亡的形态改变.结论:液氮中冻存2年的转染瘤细胞体外生长良好,抗体分泌稳定,特异性高,并可诱导K562人红白血病细胞凋亡.