治疗型双质粒HBV DNA疫苗的构建及其鉴定

为构建以人白细胞介素-2/γ干扰素(hIL-2/hIFN-γ)融合基因为佐剂的治疗型HBV DNA疫苗,采用DNA重组技术分别构建含有HBV包膜中蛋白(preS2*S)抗原和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白的真核表达质粒即pcDNAS2*S和pcDNAIIF,酶谱和测序分析表明克隆的preS2*S和hIL-2/hIFN-γ融合蛋白基因片段的方向、序列与预期相符.用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,并用ELISA检测转染细胞培养上清中目的基因表达水平.结果显示,质粒转染后48h达峰值,分别为HBsAg(P/N)=7.63、IL-2=10.35ng/ml、 IFN-γ=7.90 ng/ml.以CTLL-2依赖细胞株/MTT比色法和微量细胞病变抑制法(WISH-VSV)检测 pcDNAIIF转染后48h培养上清中IL-2及IFN-γ活性,结果分别为998U/ml和249U/ml.证明构建的重组质粒pcDNAS2*S和pcDNAIIF结构正确,在体外转染细胞其质粒得到分泌表达并保留生物学活性.