重组柞蚕抗菌肽AD的纯化及鉴定

目的 从重组柞蚕抗菌肽AD毕赤酵母发酵液中分离纯化出抗菌肽纯品,并对其进行纯度、分子量和抗菌作用的鉴定.方法 用离子交换和疏水层析法对发酵液中的重组柞蚕抗菌肽AD进行分离纯化,用高效液相色谱法分析产物的纯度,再用基质辅助激光解析一飞行时间质谱仪对产物进行分子量鉴定,并结合传统微量肉汤稀释法和流式细胞术分析重组柞蚕抗菌肽AD纯品对E.coli敏感株及耐药株的抗菌作用.结果 重组柞蚕抗菌肽AD经离子交换和疏水层析纯化后的纯度达到98.40％,分子量为4068.15Da,与所设计的重组柞蚕抗菌肽AD大小相近.所纯化出的重组柞蚕抗菌肽AD对E.coli的敏感株ATCC25922和产β-内酰胺酶耐药株株ATCC35218的抗菌作用均为MIC 8μg/mL,而头孢他啶和氨苄西林对耐药株ATCC35218的MIC的值分别为8μg/mL和＞32μg/mL.结论 成功纯化分离出具有自主知识产权的重组柞蚕抗菌肽AD,其对E.coli敏感株和耐药株具有相同的抗菌效果.