外源ABA处理大麦胚的均一化cDNA文库的构建

构建外源ABA处理大麦胚的均一化cDNA文库是利用酵母双杂交方法筛选与靶蛋白相互作用蛋白的前提条件.为给大麦抗逆基因的研究及抗逆转基因大麦材料的创制奠定基础,利用5 μmol·L-1ABA和蒸馏水分别处理大麦种子0h、6h、12 h、24 h,剥取大麦的胚,用热酚法提取总RNA,利用SMART原理进行反转录PCR并进行均一化处理获得ds-cDNA.经SfiⅠ酶切的ds-cDNA与pGADT7-Rec栽体连接后,转化大肠杆菌感受态细胞DH10B构建文库.结果表明,文库的容量为1.1×106,插入片段大于1 000 bp,集中在1 000～3 000 bp之间,符合酵母双杂交文库的要求.