猪流行性腹泻病毒分离鉴定与实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

采用Vero-76细胞系从临床样品小肠内容物中分离到1株猪流行性腹泻病毒（PEDV ），通过RT-PCR进行了鉴定。针对PEDV ，参照保守的M 基因序列设计了特异性引物和探针，建立了针对PEDV特异性的实时荧光定量RT-PCR检测方法（PEDV-rRT-PCR）。所建立的方法特异性强，与传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪细小病毒等猪主要病原体无交叉反应；方法灵敏度高，检测灵敏度达到重组质粒10-8稀释度（约20 cop）；重复性好，组内变异系数≤0．26％。20份田间样品检测结果表明，所建立的PEDV-rRT-PCR方法快速、灵敏，检测结果准确可靠，适合用于PEDV 的快速检测和流行病学调查。