疫霉侵染辣椒基因差异表达的cDNA-AFLP分析

采用cDNA-AFLP (complementary DNA-ampliifed fragment length polymorphism)技术,以高抗疫霉病辣椒品种‘L11’接种疫霉菌的叶片为材料,对6叶期辣椒幼苗灌根接种疫霉菌侵染后6个时间点的叶片基因表达谱进行了差异分析。利用86对引物组合,共筛选出了363条差异表达的cDNA片段,对其中100个表达差异显著的片段进行测序,最终得到73个差异片段的核苷酸序列。经Blastx比对和功能分类分析,其中45个序列与已报道的功能基因具较高同源性,其功能涉及蛋白质代谢、信号转导、防御反应、碳水化合物代谢和光合作用等。在差异片段序列基础上设计特异引物,采用基于PCR技术的96孔文库筛选方法,从文库中分离得到2个差异基因的全长cDNA,荧光定量PCR分析结果显示其表达模式符合cDNA-AFLP表达谱。本研究利用cDNA-AFLP技术筛选到的一批与抗疫霉病相关的基因片段,可进一步用于功能鉴定和分子育种。