Epstein-Barr病毒转化免疫性血小板减少症患者外周血B淋巴细胞并建立永生化细胞株

目的:体外建立正常人及免疫性血小板减少症(ITP)患者永生化的B淋巴母细胞系(iBLCLs)并鉴定其生物学活性,为研究ITP的发病机制奠定基础.方法:采用B958细胞产生的EB病毒(EBV)感染正常人及ITP患者外周血单个核细胞(PBMCs),获得永生化细胞株后,光学显微镜观察iBLCLs细胞形态学特征,RT PCR技术检测EBV中潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达,流式细胞术分析iBLCLs细胞周期及检测细胞膜表面CD19分子标记的表达.结果:5例正常人PBMCs均成功转化为iBLCLs;5例ITP患者中3例PBMCs转化成iBLCLs,其余2例PBMCs在转化16天左右开始退化未能成功建株.ITP患者成功转化所需时间明显长于正常人.所有iBLCLs均表达LMP-1基因序列和细胞膜表面CD19分子.结论:PBMCs感染EBV后建立的iBLCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学活性特征,在转化过程中第16天左右存在一个"危机期",未感染EBV的细胞.细胞数量进行性减少并死亡.部分ITP患者的PBMCs因不能度过这个"危机期"而转化失败.如何改进实验条件以提高ITP患者PBMCs中B淋巴细胞建株的成功率有待进一步研究,从而为体外研究ITP免疫异常机制提供靶细胞.