重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析
Foreign Medical Sciences（2004）
Abstract
目的制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factortothe TNF family,BAFF)胞外区134～285氨基酸残基段,为BAFF的深入研究创造条件.方法提取人新鲜扁桃体组织总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区134～285氨基酸残基cDNA,经序列测定后,构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达及Ni2+-NTA柱层析纯化目的蛋白,行SDS-PAGE和Western印迹检测.最后经MTT法检测其增殖活性.结果RT-PCR扩增得到了459 bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF134-285的cDNA序列一致,SDS-PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为6×His-BAFF134-285融合蛋白并存在于包涵体中.活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖.结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF134-285,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性,为进一步的研究奠定了基础.
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Key words
activity analysis,preparation,human
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