酸性条件下神经生长因子对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a表达的影响

目的:pH 6.0培养条件下观察神经生长因子(NGF)对大鼠关节软骨细胞酸敏感离子通道1a(ASIC1a)基因和蛋白表达的调控作用及其机制.方法:体外提取培养原代大鼠膝关节软骨细胞,酸性环境下观察细胞NGF高亲和力受体Trk-A的表达情况;不同浓度NGF刺激观察ASIC1a的表达变化;10 ng/mL NGF刺激不同时间胞外信号调节激酶(ERK1/2)及c-fos磷酸化的时效关系,阻断ERK1/2(PD98059 30 μmol/L)后观察c-fos磷酸化水平和ASIC1a的表达;RT-PCR检测ASIC1a基因的表达,Western Blot检测Trk-A、ASIC1a、ERK1/2、p-c-fos蛋白的表达.结果:在酸性环境下NGF的高亲和力受体Trk-A表达比正常环境可高出3倍,ASIC1a的表达随着NGF的浓度升高而升高,10 ng/mL时趋于稳定;NGF刺激后,ERK1/2及c-fos活化增强,4h达到最大水平;阻断了ERK1/2之后,p-c-fos和ASIC1a蛋白表达下降,差异具有显著性(P＜0.01).结论:在酸性环境下,NGF促进了大鼠关节软骨细胞ASIC1a表达的上调,并且ERK1/2信号通路的活化可能参与了这一过程.