猪源多杀性巴氏杆菌脂蛋白B基因的生物信息学分析与原核表达

目的 原核表达猪源多杀性巴氏杆菌脂蛋白B(Pasteurella lipoprotein B,PlpB)基因,并进行生物信息学分析.方法 采用PCR法从猪源多杀性巴氏杆菌CVCC446株(B:2型)中扩增PlpB基因,克隆入含GST标签的原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒,测序后,利用生物信息学方法对测序结果进行同源比对,分析其蛋白质的一级结构、二级结构及三级结构,并在三级结构的基础上进行同源建模.将重组表达质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,透析法纯化重组GST-PlpB蛋白,Western blot法分析其反应原性.结果 重组表达质粒经酶切鉴定证明构建正确.PlpB基因全长771 bp,编码257个氨基酸残基.生物信息学分析显示,PlpB蛋白是一个具有较高同源性的脂蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主要构件,其空间结构与创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的免疫原性脂蛋白A(3K2D_A)相似性较高,以此为模板,成功构建了可靠的三维结构分子模型.表达的重组GST-PlpB蛋白相对分子质量约为56 000,主要以可溶性形式存在;纯化的重组GST-PlpB蛋白可见相对分子质量约56 000的单一条带;该蛋白具有良好的反应原性.结论 成功从猪源多杀性巴氏杆菌CVCC446株(B:2型)中扩增出PlpB基因,利用生物信息学方法,结合网络数据库,对PlpB蛋白进行了预测,构建了可靠的三维结构模型,并在大肠埃希菌中表达了重组GST-PlpB蛋白,为进一步研究HpB的功能、特征及疫苗的研制奠定了基础.