siArid2重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

目的:通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2(siArid2)的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响.方法:设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒.将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1～3.用构建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒.MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化.结果:成功构建了高滴度的重组腺病毒AdsiArid2-1～3.经Western blotting鉴定,AdsiArid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒.MTS结果显示,AdsiArid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快.流式细胞术检测结果显示,AdsiArid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多.结论:成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒.沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换.