黄芩素对A431细胞埃兹蛋白表达及侵袭力的影响

目的 探讨黄芩素是否通过抑制埃兹蛋白来实现抑制A431细胞增殖、细胞周期进程及伪足的形成.方法 采用细胞划痕、微孔滤膜法(Transwell)检测黄芩素对A431细胞爬行的影响;RT-PCR检测黄芩素对A431细胞埃兹蛋白mRNA表达量的影响;Western印迹检测黄芩素及siRNA对A431细胞埃兹蛋白表达及其磷酸化的影响;扫描电镜观察黄芩素及siRNA对A431细胞伪足形成的影响.结果 细胞划痕实验显示,培养24 h时,黄芩素5、10、20 μmol/L组细胞闭合宽度占原宽度的比例分别为13.3%±1.7%、7.6%±1.6%和5.9%±1.3%,黄芩素呈浓度依赖性抑制A431细胞爬行运动,黄芩素各组与阴性对照组(16.3%±2.3%)比较,差异均有统计学意义.Transwell实验证实,5、10、20 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,穿过人工基底膜的细胞数量分别为(46.5±3.8)、(34.3±3.4)和(25.3±2.3)/个/Hp,各处理组与阴性对照组(56.3±3.8个/Hp)经方差分析,P<0.01;而与siRNA组(28.3±2.1个/Hp)比较,P>0.05.Western印迹及RT-PCR检测显示,0、5、10、20、40 μmol/L黄芩素处理A431细胞48 h后,黄芩素呈浓度依赖性地抑制A431细胞埃兹蛋白/磷酸化埃兹蛋白及埃兹蛋白mRNA表达,埃兹蛋白mRNA与β-肌动蛋白mRNA灰度值之比值与阴性对照组比较,P值均<0.01;而与siBNA组比较,P>0.05;埃兹蛋白、磷酸化埃兹蛋白在A431细胞中的表达量(与β-肌动蛋白灰度值之比)与阴性对照组比较,P值均<0.01;而40 μmol/L黄芩素处理组与siRNA处理组比较,P>0.05.扫描电镜显示,48 h后20 μmol/L黄芩索组A431细胞伪足数量为(513±1.9)个,长度明显缩短,与阴性对照组(22.6±2.8个)比较,P<0.01;siRNA组为(4.5±2.8)个,与阴性对照组比较,P>0.05.结论 黄芩素可能通过直接或间接抑制埃兹蛋白表达及其磷酸化而抑制A431细胞的增殖、爬行,从而达到抗肿瘤增殖及浸润转移的目的.