抗羊口疮病毒囊膜蛋白B2L小鼠多克隆抗体的制备和应用

目的 获取羊口疮病毒(ORFV)囊膜蛋白B2L并制备鼠抗B2L蛋白多克隆抗体.方法 采用PCR扩增获得B2L基因,并将其分别克隆至原核表达载体pET-32a和真核表达载体p3×FLAG-CMV-14.两个重组表达载体均经过鉴定,重组原核表达载体使用BL21大肠杆菌表达,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白.通过Tris-尿素溶液洗去非目的蛋白,Western blot法鉴定.将定量的纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗ORFV B2L多克隆抗体.将真核表达重组质粒p3×FLAG-B2L转染Vero细胞、BHK-21细胞,使用间接免疫荧光法(IFA)对抗B2L蛋白的多克隆抗体鉴定,并应用于免疫组织化学染色检测患病羊唇部组织ORFV的表达.结果 Western blot法确定了制备的B2L蛋白的特异性;IFA结果表明制备的小鼠抗B2L多克隆抗体有特异性和反应原性,免疫组织化学染色法结果表明该抗体可以检测出患病羊唇部组织的ORFV.结论 成功制备了特异性的小鼠抗B2L多克隆抗体.