嵌合蛋白P128的表达、纯化与抗牛源葡萄球菌活性研究

将抗葡萄球菌嵌合蛋白P128编码序列优化成大肠埃希菌偏爱密码子序列,插入脑膜炎奈瑟氏菌FrpC蛋白自加工元件(SPM)与类弹性蛋白多肽(ELP)融合表达载体,将重组载体pP128-SPM-ELP转化大肠埃希菌进行诱导表达,利用ELP的温度敏感可逆相变循环(ITC)进行融合蛋白纯化,利用SPM自切割活性进行融合蛋白切割和目的蛋白回收;以牛源金黄葡萄球菌为指示菌,对回收的嵌合蛋白P128进行溶(杀)菌活性测定。结果表明:P128-SPM-ELP融合蛋白获得高水平、可溶性表达,经过两轮ITC获得的融合蛋白纯度大于90%,其自切割效率接近100%,回收的嵌合蛋白P128对金黄葡萄球菌的最小抑菌浓度为8.4μg·mL-1,且有很强的杀菌作用。证明SPM-ELP融合表达与纯化系统是简单、经济、有效的重组蛋白表达与纯化系统,获得的嵌合蛋白P128可用于葡萄球菌性奶牛疾病防治。