靶向沉默独立生长因子1基因对不典型慢性髓细胞白血病细胞生长和增殖的影响

目的：分析siRNA介导独立生长因子1（ GFI?1）基因沉默对不典型慢性髓细胞白血病（ aCML） NT1细胞生长和增殖的影响。方法采用细胞转染试剂Lipofectamine 2000，将siRNA导入对数生长期的NT1细胞，实验分为空白对照组（加入PBS和脂质体复合物）、阴性对照组（加入阴性干扰序列和脂质体复合物）和GFI?1基因干扰组（加入针对GFI?1的干扰序列和脂质体复合物）。采用实时荧光定量PCR法检测GFI?1 mRNA的表达水平，Western blot法检测GFI?1蛋白的表达水平，四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法检测GFI?1 siRNA对NT1细胞增殖的影响，流式细胞仪检测GFI?1 siRNA对NT1细胞周期的影响。裸鼠移植瘤实验检测GFI?1 siRNA对裸鼠成瘤的影响。结果实时荧光定量PCR检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的GFI?1 mRNA表达水平分别为1．010±0．005、0．918±0．006和0．367±0．017，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义（P＜0．05）。Western blot检测显示，基因干扰组的GFI?1蛋白表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组（ P＜0．05）。 MTT法检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的A值分别为1．193±0．064、1．096±0．049和0．667±0．059，基因干扰组的细胞增殖能力明显低于空白对照组和阴性对照组（P＝0．023）。流式细胞仪检测显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的 G0／G1期细胞比例分别为（48．6±3．2）％、（53．3±4．5）％和（66．7±3．8）％，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义（P＜0．05）。空白对照组、阴性对照组和基因干扰组的 sub?G1期细胞比例分别为（2．0±3．6）％、（1．9±1．3）％和（8．2±2．5）％，基因干扰组与空白对照组和阴性对照组的差异有统计学意义（P＜0．05）。裸鼠移植瘤实验显示，空白对照组、阴性对照组和基因干扰组裸鼠的肿瘤重量分别为（0．92±0．04）g、（0．83±0．06）g和（0．37±0．02）g，基因干扰组裸鼠的肿瘤重量明显小于空白对照组和阴性对照组（P＜0．05）。结论 siRNA介导GFI?1基因沉默可抑制NT1细胞生长与增殖，可能为aCML的治疗提供新的靶点。