嵌合γδ TCR结构域的αβ TCR分子的同源建模及真核表达

目的 设计并构建嵌合γδ TCR类免疫球蛋白(Ig)结构域的αβ TCR分子,并在Jurkat T细胞中观察其表达.方法 通过生物信息学分析确定TCR △Ig分子的融合位点;应用同源建模模拟嵌合TCR α和TCR β蛋白的三维结构,并应用组合扩展方法(CE)对TCR △Ig分子与野生型TCR分子的蛋白骨架以及抗原识别活性部位进行空间结构比对和分析.采用重叠PCR法分别在TCR α △Ig和TCR β △Ig的末端融合增强型青色荧光蛋白(ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(EYFP),并分别克隆入质粒pIRES2-EGFP内部核糖体进入位点(IRES)的上下游.最后将重组表达质粒pIRES-TCR β △Ig-EYFP/TCR α△Ig-ECFP转染Jurkat T细胞,共聚焦显微镜扫描分析该嵌合TCR分子的表达.结果 TCR α △Ig和TCR β △Ig的同源建模及三维结构比对结果显示,相比于野生型TCR,该嵌合TCR的可变区(V)结构无改变并且抗原识别活性中心结构保持稳定.重组表达质粒经PCR鉴定及测序分析证明载体构建成功;并且共聚焦显微镜扫描结果显示嵌合TCR分子能定位于T细胞膜表面并正常表达.结论 该嵌合TCR分子设计合理,能在Jurkat T细胞表面正常表达.