葡萄糖调节蛋白78对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响.方法 构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV-shRNA GRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV-control,分别转染人结直肠癌细胞系RKO.四甲基偶氮唑盐法实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的分布情况,划痕实验检测细胞迁移能力,裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤能力.Affymetrix人全基因组表达芯片检测GRP78表达抑制后RKO细胞中基因表达谱的变化.Western blot技术验证部分差异基因以确定结果的可靠性.结果 转染pLV-shRNAGRP78后,RKO细胞增殖能力及克隆形成数目明显受到抑制(P＜0.05),但迁移能力没有明显变化(P＞0.05);流式细胞术检测结果显示,沉默GRP78导致G1期细胞比例显著增加,而S期细胞比例显著降低(P＜0.05);裸鼠成瘤实验结果显示,沉默GRP78导致肿瘤细胞在裸鼠皮下成瘤能力显著减弱(P＜0.05).基因芯片检测结果显示,GRP78表达抑制后,共有397个基因的表达发生改变(与对照组相比,变化表达倍数≥1.2),其中上调的基因258个,下调139个,这些基因主要涉及信号转导、细胞代谢、细胞凋亡等功能.通过生物信息学分析,筛选3个(CDKN2B、MTOR及BIRC3)特异相关的差异基因进行Western blot验证,验证结果与芯片结果相符.结论 沉默GRP78可通过抑制人结直肠癌RKO细胞周期G1/S期转换,从而抑制细胞的体内外增殖生长能力,但对细胞的迁移能力无显著影响.通过基因芯片技术能够筛选和鉴定与GRP78表达改变相关的基因.GRP78可能通过调控这些基因的表达从而影响结直肠癌细胞的增殖能力.