EGCG对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期及DAPK1基因甲基化影响的研究

目的:探讨表没食予儿荼素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖、细胞周期的影响及其作用机制.方法:应用EGCG 0、50、75、100及125 μmol/L分别处理NB4细胞24、48、72、96 h后,使用CCK-8法检测各时间点和浓度的细胞增殖水平,流式细胞术检测不同浓度EGCG处理NB4细胞48 h后的细胞周期情况,RT-PCR检测DNMT1、DNMT3a、DAPK1 mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR检测DAPK1基因的甲基化状态,Western blot检测DAPK1蛋白的表达情况.结果:EGCG明显抑制NB4细胞增殖并诱导细胞阻滞于G0/G1期,且呈时间-浓度依赖性(r =0.916).EGCG呈浓度依赖性下调NB4细胞DNMT1、DNMT3a的表达,且对DNMT3a的作用更为明显.随EGCG浓度增加,DAPK1基因的甲基化程度减弱(r=-0.813),DAPK1 mRNA和蛋白表达上调(r=0.96,r=0.991).结论:EGCG通过抑制DNMT1和DNMT3a基因的表达,下调DAPK1S基因的甲基化程度,从而抑制NB4细胞增殖和诱导其细胞周期阻滞.