瘦素蛋白转基因约氏疟原虫对小鼠体质量的影响

目的 探讨含瘦素(leptin)蛋白转基因约氏疟原虫(Plasmodium yoelli)对感染小鼠体质量的影响. 方法 设计并构建含小鼠瘦素基因的疟原虫CRISPR/Cas9重组质粒,该质粒两端带有约氏疟原虫17XNL株巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的5'和3'同源序列,将外源的小鼠瘦素基因经同源重组插入至MIF基因编码区下游,构建重组质粒PYC-MIF-Leptin.将该重组质粒电转入体外培养的约氏疟原虫成熟裂殖体内,通过尾静脉注射该裂殖体感染雌性昆明小鼠1只,经乙胺嘧啶筛选和PCR鉴定获得转基因约氏疟原虫克隆.将转基因疟原虫和野生型疟原虫感染C57BL/6小鼠各1只,取眼球血和尾静脉血,通过RT-PCR和免疫荧光检测瘦素在疟原虫内是否成功表达.将含转基因疟原虫和野生型疟原虫(1×104接种量)的200μl PBS尾静脉注射感染C57BL/6小鼠各5只,阴性对照组注射等量PBS.每两天记录并统计小鼠原虫血症及体质量变化.采用SPSS 19.0软件进行统计学分析. 结果 构建了含瘦素基因和疟原虫MIF同源重组序列的重组质粒PYC-MIF-Leptin.转基因疟原虫DNA测序结果证实,瘦素基因整合入MIF基因下游,并在疟原虫中成功转录.免疫荧光实验结果表明,转基因疟原虫能够表达小鼠瘦素蛋白.转基因疟原虫组17 d体质量下降尤其明显,为(17.26±1.40)g.野生型疟原虫组和阴性对照组小鼠体质量无明显变化,而转基因疟原虫组体质量下降达10.7％(P＜0.05).两种疟原虫都在原虫血症达到10％左右时开始下降,但是转基因疟原虫增殖速度较快,最终在23 d左右均消失. 结论 表达瘦素基因的转基因约氏疟原虫可降低感染小鼠的体质量.