尖吻蝮蛇毒PCA对HUVEC活性的影响

目的:观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的超微结构及其合成组织因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)和内皮素-1 (ET-1)水平的影响,并探讨PCA的抗血栓机制.方法:实验分为对照组(DMEM液)、脂多糖(LPS)组(LPS 0.1 μg/ml)、PCA组(PCA 1 μg/ml)、PCA+ LPS组(1μg/mlPCA+0.1 μg/ml LPS),加药作用12 h后在透射电镜下观察各组细胞的内质网、线粒体形态及自噬体数量变化;ELISA检测各组培养上清中TF、vWF、ET-1含量;RT-PCR检测细胞内vWF、ET-1基因表达水平;Western blot检测细胞内TF蛋白表达水平.结果:LPS组的HUVEC与对照组相比,细胞膜不光滑、出现凸起样改变,并发生线粒体、内质网肿胀,自噬体数量增多等超微结构的改变,PCA组HUVEC的超微结构与对照组比无明显变化;与LPS组相比,PCA+ LPS组的HUVEC线粒体、内质网肿胀消失,自噬体数量明显减少.与对照组相比,LPS组细胞培养上清中TF、vWF、ET-1的含量及细胞内vWF、ET-1基因、TF蛋白的表达水平显著增高(P＜0.05);PCA组细胞培养上清及细胞内3种物质的表达量较对照组无显著变化(P＞0.05);与LPS组相比,LPS+ PCA组HUVEC培养上清及细胞内TF、vWF、ET-1的表达水平显著降低(P＜0.05).结论:1μg/ml的PCA可减轻LPS引起的HUVEC超微结构的改变,也可抑制LPS对HUVEC的TF、vWF、ET-1分泌量的增加作用.