脑红蛋白对氧糖剥夺/复氧复糖诱导的人神经母细胞瘤细胞系自噬的影响

目的 探讨脑红蛋白(Ngb)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导的入神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)自噬的影响.方法 通过在SH-SY5Y细胞中转染Ngb质粒,建立Ngb过表达(NGB OE)及相应的空载(Vector)稳转株.细胞行OGD/R处理.聚合酶链反应(PCR)检测自噬相关基因(Atg5、Atg7、BECN1)及FUN14结构域包含蛋白-1(FUNDC1) mRNA表达水平,免疫印迹方法检测自噬相关基因(LC3Ⅱ/Ⅰ)蛋白表达水平.差速离心法分离线粒体及细胞质,分别使用免疫印迹方法检测帕金森病相关蛋白(Parkin、Pink1)表达水平.结果 OGD/R处理后,自噬相关基因Atg5、Atg7、BECN1、FUNDC1 mRNA水平升高(最高分别为4.90±0.71、6.72 ±0.75、2.71±0.39及3.96±0.78倍,均P ＜0.05),细胞质中Parkin减少而线粒体中Parkin显著增加.过表达Ngb不能改变自噬相关基因Atg5、Atg7、BECN1 mRNA水平,细胞质或线粒体中Parkin无显著变化.但可以增加FUNDC1mRNA含量(3.96±0.78倍比6.86±0.63倍,P＜0.05).结论 Ngb不能影响OGD/R诱导的SHSY5Y细胞自噬或线粒体自噬水平,而对FUNDC1基因的表达有促进作用,其作用机制需要进一步深入研究.