针对CD4膜蛋白的CAR-T细胞抗T细胞淋巴瘤的活性研究

目的 探讨针对CD4膜蛋白的CAR-T细胞对CD4+T细胞淋巴瘤细胞的靶向特异性杀伤作用.方法 采用重组DNA技术构建含4-1BB共刺激分子的第二代针对CD4的CAR慢病毒载体,应用293T细胞包装慢病毒,采用流式细胞术检测T细胞的转染效率及T细胞亚群动态变化,采用流式细胞术微球法检测培养上清中IFN-γ浓度.结果 ①构建的慢病毒载体转染激活的T细胞后CAR膜蛋白阳性率达到50.0％～ 70.0％.T细胞激活后部分CD8+T细胞弱表达(dim)CD4膜蛋白.T细胞转染针对CD4的CAR慢病毒后CD4+T细胞、CD8+CD4dimT细胞逐渐被清除.②CAR-T细胞、对照组T细胞(空载体转染的T细胞)以8∶1效靶比分别与CD4+人T细胞淋巴瘤细胞株KARPAS 299细胞共培养24 h,杀伤效率分别为(96.9士2.1)％和(11.2±3.1)％,前者明显高于后者(t=7.137,P=0.028).③CAR-T细胞单独培养,与转染慢病毒载体表达人CD4的K562细胞(K562-CD4细胞)、K562细胞共培养后上清中IFN-γ浓度分别为(1 785±268)、(15 648±2 168)、(1 978±354)pg/ml,CAR-T细胞与K562-CD4细胞共培养上清IFN-γ浓度明显高于其他两组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CD4特异性CAR-T细胞效应细胞免疫表型为CD8+CD4+T细胞,在体外具有杀伤正常CD4+T细胞和CD4+T细胞淋巴瘤细胞的活性,对于CD4dimT细胞也有较好的清除活性.