血必净对百草枯诱导HK-2细胞凋亡的保护作用及机制研究

目的 探讨血必净(xuebijing,XBJ)对百草枯(paraquat,PQ)诱导人近端肾小管上皮细胞系(human kidney cell line-2,HK-2)细胞凋亡的保护作用及机制.方法 常规培养HK-2细胞.(1)PQ及XBJ干预后细胞生长抑制实验:PQ组分为0、200、400、800、1600、3200 μmol/L PQ组,干预24、48、72 h后检测细胞存活率;XBJ组分为0、5、10、20、40 mg/ml XBJ组,干预24、48、72 h后检测细胞存活率,以确定进行干预时合理的XBJ和PQ的浓度和作用时间.(2)XBJ拮抗PQ诱导HK-2细胞生长抑制实验:分为正常对照组、PQ组(800 μmol/L)、不同浓度XBJ+PQ组(分别以5、10、20 mg/ml的XBJ预培养1 h后以800 μmol/L的PQ继续培养),各组分别培养24、48、72 h后检测细胞存活率.(3)将HK-2细胞分为正常对照组、PQ组(800 μmol/L的PQ作用24 h)、PQ+XBJ组(10 mg/ml的XBJ预处理1 h后以800 μmol/L的PQ作用24 h)、XBJ对照组(10 mg/ml的XBJ作用24 h),用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法检测各组细胞内Bcl-2和BAX的蛋白表达情况,caspase-3及caspase-9活力试剂盒检测细胞内caspase-3及caspase-9活力.结果(1)PQ能明显降低HK-2细胞的存活率,并且呈现出时间和浓度依赖性,其中800 μmol/L的PQ作用24 h后HK-2细胞的存活率约为55%;20 mg/ml以下的XBJ在72 h内对HK-2细胞的存活率无明显影响.(2)与PQ组比较,PQ+XBJ组HK-2细胞的存活率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).(3)与正常对照组比较,PQ组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与PQ组比较,PQ+XBJ组细胞凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).(4)与正常对照组比较,PQ组细胞内Bcl-2蛋白表达明显较低,BAX蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与PQ组比较,PQ+XBJ组细胞内Bcl-2蛋白表达明显升高,BAX蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).(5)与正常对照组比较,PQ组细胞内caspase-3及caspase-9活力明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与PQ组比较,PQ+XBJ组细胞内caspase-3及caspase-9活力明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 XBJ(10 mg/ml)对PQ(800 μmol/L)诱导的HK-2细胞损伤有明显的保护作用,其可以通过减轻PQ诱导HK-2细胞凋亡,来提高细胞的存活率.