刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆表达及鉴定
Zhongguo xue xi chong bing fang zhi za zhi = Chinese journal of schistosomiasis control(2016)
摘要
目的:克隆刚地弓形虫硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)基因,构建原核表达载体,通过诱导表达和纯化蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增刚地弓形虫Trx基因,克隆至原核表达载体pET?28a(+)中,转化大肠埃希菌(E. coli)Rosetta,用IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blotting技术鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功从刚地弓形虫cDNA中扩增出Trx目的基因,构建了Trx/pET?28a(+)重组质粒,获得抗Trx重组蛋白的多克隆抗体。Western blotting技术检测出弓形虫Trx蛋白的特异性条带。结论用制备的兔抗Trx多克隆抗体能检测弓形虫Trx在速殖子内的表达,为进一步深入研究刚地弓形虫Trx功能奠定了基础。
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关键词
Cloning,Identification,Polyclonal antibody,Prokaryotic expression,Thioredoxin,Toxoplasma gondii
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