插入T-DNA片段构建部分水稻突变体株系

通过农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导,将T-DNA片段高效插入水稻中花11的基因组DNA中。利用二次枝梗种子和未成熟种子的盾片愈伤组织作为转化起始物,探索并优化了影响愈伤组织诱导率、再生率和转化率的试验条件,得到近10 000株转化植株。经PCR分析和Southern 杂交证明已将外源基因整合到水稻基因组中。当代转基因植株可抗0.2%的除草剂Basta。200余棵T0代转化株系出现白化苗、宽叶、狭叶、黄叶、高秆、矮化并杂草化、不育、白化穗、皱穗和抽穗延迟等突变表型,结实率普遍较低。对3个转基因水稻突变株的子代进行bar基因分析发现,bar基因在子代中呈现3∶1的分离规律。试验中发现了转基因子代的突变征状的分离与bar基因的分离相一致现象。对具有突变征状的转基因水稻植株进行T-DNA 边序分析发现这些突变很可能与T-DNA插入有关。