高效液相色谱-串联质谱法测定人血清中伏立诺他及M2代谢物浓度

目的 建立准确、灵敏的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定人血清中伏立诺他(SHA)及其M2代谢物浓度,以用于SHA药物代谢动力学研究.方法 采用API3000LC-MS/MS液质联用系统,Gemini C18(3 μm,50 mm×3 mm)色谱柱,流动相为甲醇∶乙腈∶水∶1 mol/L氨水∶甲酸(25∶15∶60∶0.1∶0.05),流速0.23 mL/min,血清样品经酸化后用3.5 mL含3％异丙醇重蒸乙醚萃取浓集后进样,采用电喷雾离子源,正离子多反应离子监测模式检测,d5-SHA作内标.结果 SHA、M2和内标的保留时间分别为4.1、3.1和4.0 min.SHA和M2线性范围分别为1～1 000 ng/mL和2～2 000 ng/mL,最低定量限分别为1.0和2.0 ng/mL,方法回收率分别为93.0％～99.3％和88.11％ ～ 104.12％,基质效应均＜9％,SHA批内和批间精密度分别＜5.5％和＜9.0％,M2批内和批间精密度均＜11％.血清样品在冰箱冷冻保存63 d,反复冻融3次,在室温放置6h,处理后的样品在进样室(8℃)放置16h、萃取物在冰箱(4℃)中放置36 h均稳定.结论 HPLC-MS/MS法具有快速、简便、灵敏、准确等特点,适用于SHA和M2代谢物的血药浓度的测定.