镍冶炼烟尘染毒致NIH/3T3细胞线粒体损伤及L-抗坏血酸的干预作用

目的 研究镍冶炼烟尘对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)线粒体损伤的影响及L-抗坏血酸的保护作用.方法 将NIH/3T3细胞分为染毒组和L-抗坏血酸干预组.染毒组加入镍冶炼烟尘配制浓度分别为0.00、25.00、50.00、100.00 μg/ml的混悬液,干预组在染毒前额外加入L抗坏血酸(100 mmol/L).利用MTT法检测细胞生长抑制率,钙黄绿素-AM荧光探针检测细胞线粒体膜通道孔(MPTP)变化,JC-1荧光染色观察并检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,比色法定量检测细胞线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性变化.结果 随着染毒浓度升高,染毒组和干预组细胞生长抑制率均明显增加.在25.00、50.00、100.00 μg/ml浓度时干预组抑制率均低于染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).在50.00、100.00μg/ml浓度时,染毒组MPTP荧光强度为564.940±14.015、436.613±31.275;干预组MPTP荧光强度为611.203±20.053、498.840±21.308,干预组的荧光强度均高于染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05);荧光显微镜下干预组绿色荧光强度低于染毒组,干预组红色荧光强度高于染毒组.在25.00、50.00、100.00 μg/ml浓度时,染毒组MMP绿色与红色荧光比值分别为16.579±0.220、14.453±0.280、11.133±1.007;干预组MMP绿色与红色荧光比值分别为18.697±0.163、16.260±0.520、13.703±0.715,干预组绿色与红色荧光比值均高于染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).在25.00、50.00、100.00 μg/ml浓度时,干预组的复合物Ⅰ、Ⅳ活性均高于染毒组,在100 μ#ml浓度时,复合物Ⅱ染毒组活性为0.754±0.013,干预组活性为0.827±0.032,干预组的复合物Ⅱ活性高于染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 随着镍冶炼烟尘浓度升高,NIH/3T3细胞线粒体损伤程度上升,L-抗坏血酸对镍冶炼烟尘致细胞线粒体损伤有一定保护作用.