利用iTRAQ技术联合2D LC-MS研究不同加工工艺鹿茸的差异蛋白质组学

利用iTRAQ同位素标记法结合2D LC-MS/MS法对不同加工工艺鹿茸(鲜品、煮炸、直接冻干、匀浆、冻干加保护剂、冻干未加保护剂、冻干加保护剂40℃,10天)进行比较蛋白质组研究.经质谱共分析共得到蛋白质1 015种.利用Protein Pilot软件(Version 4.5)进行比较分析,差异蛋白(阈值在＞1.50或＜0.60范围,P≤0.05)蛋白为87种.变化最大的是煮炸鹿茸组,其差异蛋白质(P≤0.05)相对于鹿茸鲜品,上调蛋白质有24种,下调蛋白质有33种.7种差异极显著(P≤0.001)下调蛋白多具有参与钙离子结合及ATP结合等功能.其他组差异蛋白质种类没有明显变化,与通过层次聚类分析的结果相同.冻干加保护剂(海藻糖)工艺可提高差异极显著蛋白质包括Ⅱ型、Ⅻ型胶原蛋白质(P≤0.001)的相对含量,并且使得功能显著蛋白质与鲜品鹿茸比较,含量相对增加.这些蛋白具有活化血小板、维护精原细胞、使肿瘤细胞表达失调等生理功能.通过对差异蛋白质的层次聚类(hierarchical clustering)及GO (gene ontology)注释分析,表明不同加工工艺鹿茸与鲜品鹿茸的差异蛋白质在分子功能、生物过程及细胞成分中,具有广泛的生物学功能覆盖范围,其中分子功能主要体现在结合功能(52.7％)、催化活性功能(25.3％)、结构分子活性及转运功能(6.6％).