体外模拟体内生理环境寄养断肢系统采用远端缺血处理灌注方法对保存断肢的作用研究

目的 研究体外模拟体内生理环境寄养断肢系统采用远端缺血处理(remote ischemic conditioning,RIC)灌注方法对保存断肢的作用.方法 选取健康成年雄性巴马小型猪18只,体质量24～30 kg,随机分为3组(n=6).A组为正常对照组,未经任何缺血处理;B、C组采用右后肢完全离断并置于室温保存3h建立骨骼肌缺血模型,之后将断肢接入体外模拟体内生理环境寄养断肢系统,B组进行持续血液灌注,C组行RIC灌注后再持续血液灌注.灌注8h后取各组骨骼肌标本,行透射电镜形态学观察;采用Western blot检测组织中B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)及半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白水平,ELISA检测线粒体及细胞基质内细胞色素C含量.结果 透射电镜观察示,与B组相比,C组骨骼肌纤维排列整齐紧凑,线粒体肿胀程度轻;Westernblot检测示,B、C组Bcl-2及Caspase-3蛋白水平均较A组明显升高;与B组比较,C组Bcl-2蛋白水平显著升高,而Caspase-3蛋白水平显著降低;组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).ELISA检测示,与A、C组比较,B组线粒体内细胞色素C含量显著降低,但细胞基质内含量明显升高,比较差异均有统计学意义(P＜0.05);A、C组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 RIC灌注方法可以显著抑制缺血再灌注引起的骨骼肌损伤,体外模拟体内生理环境寄养断肢系统采用RIC灌注可能起到延长断肢体外寄养时间的作用.