ANÁLISE IN VITRO DA EXPRESSÃO GÊNICA DE FATORES DA MATRIZ EXTRACELULAR EM CÉLULAS DE ÂNULO FIBROSO SOB INFLUÊNCIA DE PRODUTOS DE CÉLULAS ENDOTELIAIS DURANTE O PROCESSO DE NEOVASCULARIZAÇÃO DO DISCO INTERVERTEBRAL

Objetivo: Analisar o efeito de produtos proteicos de celulas endoteliais sobre o metabolismo de celulas de ânulo fibroso (AF) em ambiente controlado de cultura celular in vitro . Metodos: Celulas de AF humano foram expandidas em camada unica e tratadas com proteinas obtidas a partir do meio de cultura de celulas da linhagem celular HMEC-1 ( Human Micro Endothelial Cells) (125μg/ml). Apos 72hs de tratamento, isolou-se RNA das celulas de AF para analise da expressao genica e coletou-se meio de cultura para analise de expressao proteica. Resultados: A analise da qRT-PCR demonstrou aumento da expressao genica das metaloproteinases de matriz (MMPs) nas celulas de AF tratadas com produtos proteicos das celulas endoteliais em comparacao com grupo controle de celulas de AF: MMP-1 243,10 vezes (pu003c0,05), MMP-2 1,37 vezes (pu003c0,05), MMP-3 39,83 vezes (pu003c0,05) e MMP‑13 5,70 vezes (pu003c0,05). Em contraste, os inibidores teciduais das metaloproteinases (TIMPs) apresentaram supressao da expressao genica de TIMP-2 (0,55 vezes) (pu003c0,05) e TIMP-3 (0,60 vezes) (pu003c0,05) nos grupos expostos. A expressao do agrecan (0,83 vezes) (pu003c0,05), componente importante da matrix extracelular, tambem estava diminuida. Foi realizada deteccao de MMP-1 e MMP-3, confirmando os resultados de PCR atraves de tecnica de western blot. Conclusoes: Neste estudo observamos que proteinas produzidas pelas CEs induziram a expressao de MMPs e suprimiram a expressao de TIMPs e aggrecan nas celulas  primarias do disco intervertebral humano objetivando desenvolvimento de potenciais terapias no tratamento da degeneracao do disco intervertebral e dor discogenica associada.