Étude des polymorphismes géniques plaquettaires : discordance phénotype - génotype et impact de techniques standardisées sur l’interprétation du génotypage des alloantigènes plaquettaires humains (HPA)

Le diagnostic des thrombopenies alloimmunes repose sur la caracterisation des alloanticorps et la correlation de leurs specificites avec le phenotype HPA des patients. Le phenotypage des plaquettes permet d’identifier directement ces alloantigenes mais requiere : (1) l’utilisation de serums de reference qui peuvent etre rares, et (2) une quantite minimale de plaquettes difficile a obtenir chez les patients tres thrombopeniques et les nouveau-nes. De ce fait, les tests de genotypage sont couramment utilises comme seule technique d’identification des alloantigenes. Au-dela des variations liees aux systemes HPA (28 systemes bi-alleliques ( http ://www.ebi.ac.uk/ipd/hpa/ ), les genes sont polymorphes. La dbSNP ( http ://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp_ref.cgi?locusId=3690 ) rapporte 1244 variations du gene ITGB3 codant pour la β3 (ou GPIIIa). Ces variants peuvent fausser les genotypages HPA et les rendre discordants avec les phenotypes identifies. De telles discordances ont ete observees pour les systemes HPA-1, -2 et -5 (Perichon et al., 1996 ; Bertrand et al., 2006, 2010 et 2013, Nogues et al., 2013 and Conti et al., 2014). Les techniques courantes de genotypage basees sur la PCR (sequencage, PCR-RFLP, PCR-ASA (ou SSP) et Beadchips) peuvent etre affectees. Une mutation inconnue localisee dans la zone d’hybridation des amorces peut bloquer l’amplification independamment du polymorphisme HPA etudie. Dans les techniques type PCR-ASO, ces mutations peuvent bloquer l’hybridation de la sonde specifique. Dans ce contexte et en absence de phenotypage, il est recommande d’utiliser conjointement deux techniques de genotypages dont les amorces ciblent des sequences differentes du gene d’interet.