RT PCR检测毕赤酵母外源β甘露聚糖酶基因拷贝数

利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β甘露聚糖酶基因（ man）拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ gap）为内参基因，分别构建含有gap和man的克隆质粒，进行RT PCR反应构建gap和man双标准曲线；获得的双标准曲线具有良好的重复性，其相关系数（ R2）均为0?999，其扩增效率分别为105?1％和102?2％。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT PCR检测，通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示：预先经过博莱霉素（ Zeoicn）抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。