特异识别HIV-1序列的锌指蛋白的表达纯化及其在Biacore CM-5芯片上的固定

目的:为了更好地利用Biacore 3000研究锌指与核酸的相互作用,将特异性识别HIV-1 5'端一段保守序列的三锌指蛋白固定在CM-5芯片上.方法:将特异性识别HIV-1 5'端一段保守序列5'-CTGTGTTTG-3'的三锌指基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达重组三锌指蛋白,超声碎菌进行SDS-PAGE分析;包涵体形式的表达产物用盐酸胍溶解后,经一步凝胶柱复性并纯化;随后摸索适宜固定的pH值并通过化学方法进行固定.结果:表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化及柱复性后的蛋白纯度为98.8%,并在CM-5芯片上成功固定.结论:本研究为利用Biacore实时定量研究锌指蛋白与其识别DNA的相互作用进行了尝试.