应用shRNA慢病毒技术抑制MCF7/MX100细胞中乳腺癌耐药蛋白的表达和功能

乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在肿瘤细胞中的过表达可能导致肿瘤耐药性.RNA干扰是一种选择性抑制目的基因表达的实用技术.本研究旨在应用RNA干扰技术调控BCRP的表达和功能.首先在过表达BCRP的耐药细胞MCF-7/MX100中,评价了三种靶向于BCRP的siRNAs (si-BCRP1,si-BCRP2和si-BCRP3).研究发现si-BCRP2和si-BCRP3对BCRP的mRNA和蛋白的抑制率分别超过90％和70％,进而导致MCF-7/MX100细胞中米托蒽醌的积聚显著上升.进一步的研究将生成si-BCRP2和si-BCRP3的shRNA序列克隆至慢病毒表达载体pTRIPZ中,并采用慢病毒介导的转基因体系建立了稳定表达siRNA的MCF-7/MX100细胞.在该细胞系中,si-BCRP2和si-BCRP3对BCRP的mRNA的抑制率分别达到72％和56％,对其蛋白的抑制率分别为70％和53％.在进一步的研究中,该细胞系被用于中药活性成分的筛选,以评价BCRP的底物和抑制剂.结果显示,BCRP低表达的MCF-7/MX 100细胞可能作为良好的细胞模型被用于临床前研究.