肝癌组织靶向性正义与反义表达载体pEBAF/N-ras的构建*

目的:用分子克隆技术构建肝癌组织特异性N-ras cDNA正义与反义表达载体.方法:用BamHI酶切携带目的基因的质粒pZIP-NeoSV(X)1,获得1.06kb N-ras cDNA;同时以BamHI将载体pEBAF线性化,并行去磷酸化修饰,用T4 DNA连接酶将两者连接,转化感受态细菌DH5α.先以酶切和随机引物法标记的N-ras cDNA探针进行菌落原位杂交筛选阳性重组克隆,再以PvuⅡ酶切鉴定插入方向,同时进行DNA测序和同源性分析.结果:成功构建肝癌组织特异性正义与反义表达载体pEBAF/s-N-ras和pEBAF/as-N-ras.结论:成功构建的N-ras cDNA正/反义表达载体,为原发性肝癌的发生机理和基因治疗研究奠定良好的基础.