Transformación del hongo fitopatógeno Sclerotium cepivorum Berk empleando fusión de protoplastos

La pudricion blanca, una de las enfermedades mas preocupantes para los productores de ajo (Allium sativum), es causada por el hongo fitopatogeno Sclerotium cepivorum Berk. Con el fin de desarrollar procedimientos de biologia molecular para el hongo, en este trabajo se describe un metodo de transformacion empleando fusion de protoplastos en presencia de polietilenglicol 3350 (PEG). Se empleo el plasmido pAN7-1 que confiere resistencia a higromicina B, el cual contiene el gen higromicina fosfotransferasa B (hph) de Escherichia coli bajo el promotor gliceraldehido fosfato deshidrogenasa (gpdA) y el terminador antranilato sintetasa (trpC) del hongo filamentoso Aspergillus nidulans. Las transformantes recuperadas en el medio de cultivo de regeneracion papa dextrosa agar-sorbitol (PDA-S) en presencia de 200 µgmL-1 de higromicina B se analizaron amplificando un fragmento del gen bacteriano hph mediante PCR con oligonucleotidos especificos: Hig 1, Sentido 5´ GAC CTG CTG AGG TCC CTC 3´ y Hig 2, antisentido 5´ GCC CTC GGA CGA GTG CTG 3´. Se obtuvieron frecuencias de 12-18 transformantes de S. cepivorum por µg de ADN vector. Los resultados descritos en el presente trabajo contribuiran en la caracterizacion molecular de genes involucrados en el fenomeno de patogenesis de S. cepivorum sobre el ajo.