真核表达载体 pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的构建表达及对神经胶质瘤细胞U87的影响

目的：以pEGFP-N3为载体，构建融合基因M-IL-2（88 Arg，125 Ala）的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala），检测融合基因在神经胶质瘤细胞U87中的表达以及重组蛋白对U87细胞的影响，为癌症的基因治疗提供实验基础。方法：通过PCR获得实验所需要的M-IL-2（88Arg，125Ala）基因片段，酶切后克隆入载体pEGFP-N3，构建M-IL-2（88Arg，125Ala）融合基因的真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）。重组质粒经PCR、限制性内切酶分析及DNA序列测定证实构建成功后，用脂质体LipofectamineTM2000转染神经胶质瘤细胞U87，使用荧光显微镜观察转染效率，RT-PCR及Western blot检测M-IL-2（88Arg，125Ala）融合蛋白在U87细胞中的表达，CCK-8方法检测融合蛋白对U87细胞的影响并观察细胞形态变化。结果：经PCR、限制性内切酶酶切分析及DNA序列测定证实，重组真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88 Arg，125 Ala）构建成功，经RT-PCR及Western blot检测证实重组基因可在U87细胞中表达，CCK-8方法检测到融合蛋白对U87细胞增殖有一定的影响。结论：真核表达载体pEGFP-N3-M-IL-2（88Arg，125Ala）构建成功，融合基因M-IL-2（88Arg，125Ala）可在U87细胞中表达且融合蛋白对肿瘤细胞的增殖有一定影响，为融合毒素M-IL-2（88Arg，125Ala）基因的进一步研究奠定了基础。