β-arrestin-2通过抑制自噬减轻小鼠肝脏缺血-再灌注损伤

目的：探讨β-arrestin-2对小鼠缺血-再灌注（IR）肝脏自噬的影响及其在肝脏缺血-再灌注损伤（IRI）中的作用。方法采用β-arrestin-2野生型（WT）及基因敲除（KO）小鼠制作肝脏 IR 模型（70％肝脏缺血90 min 后恢复肝脏血流）。实验分为4组：即 WT 小鼠假手术组（WT ＋Sham 组）、WT 小鼠 IR 组（WT ＋IR 组）、KO 小鼠假手术组（KO ＋Sham 组）、KO 小鼠 IR 组（KO ＋IR 组），每组各18只。再灌注6、12、24 h 收集各组小鼠血清和肝组织标本。通过检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平、肝组织苏木素-伊红（HE）染色和病理学分析判断肝脏损伤程度，用免疫组织化学（免疫组化）染色和蛋白免疫印迹法检测自噬关键蛋白轻链3（LC3）的表达、透射电子显微镜（透射电镜）观察肝组织中的自噬体来分析判断肝脏自噬活动情况。结果与Sham 组相比，IR 组再灌注后各时间点血清 ALT、AST 显著升高（均为 P ＜0.01），KO ＋IR 组较 WT ＋IR 组升高更明显（均为 P ＜0.01）。肝组织 HE 染色显示，WT ＋Sham 组和 KO ＋Sham 组再灌注后各时间点肝细胞形态、肝小叶结构正常；KO ＋IR 组和 WT ＋IR 组再灌注后6 h 肝细胞轻、中度肿胀，肝窦稍扩张，12 h 肝细胞重度肿胀，炎症细胞浸润，片状损伤区域明显，24 h 肝索排列趋于规则；与WT ＋IR组比较，KO ＋IR 组再灌注后各时间点的损伤程度更严重和范围更大。免疫组化染色和蛋白免疫印迹法结果显示再灌注后6、12 h 自噬关键蛋白 LC3的表达呈上升趋势，24 h 表达略有下降，其中KO ＋IR 组的表达水平高于 WT ＋IR 组。肝组织透射电镜结果显示再灌注后各时间点 IR 组的自噬体数量均明显高于 Sham 组（均为 P ＜0.01），KO ＋IR 组的自噬体数量较 WT ＋IR 组明显增多（P ＜0.05）。结论β-arrestin-2可能通过抑制自噬来减轻小鼠肝脏 IRI。