重庆地区小鼠诺如病毒的感染及其对免疫功能影响的初步研究

目的:建立实时荧光定量RT-PCR检测方法,普查重庆市实验小鼠诺如病毒(munne Norovirus,MNv)的感染情况及其对BABL/c-nu小鼠免疫功能影响的初步研究.方法:①根据GenBank中收录的MNV全基因组序列,设计MNV特异性引物,检测其特异性、灵敏度、重复性和稳定性,并和两个实验动物质量检测单位对123份小鼠临床样本开展比对检测,以最终构建荧光定量RT-PCR检测方法.②应用该方法比较小鼠不同肠道排泄物(盲肠内容物、新鲜粪便和排出体外24h粪便)中MNV的检出情况.③应用该方法普查重庆市实验小鼠感染MNV的情况.④6～8周的BABL/c-nu小鼠被随机分为3组(n=3):正常对照组、MNV感染30 d组、MNV感染60d组,收集各组小鼠血清及肝、肺、脾、结肠,HE染色观察各脏器的病理变化;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清、脾和结肠肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及干扰素-γ(interfemn gamma,IFN-γ的含量.结果:①建立的荧光定量RT-PCR方法特异性强,与同种属其他病毒均不发生交叉反应,方法的灵敏度、重复性和稳定性良好,与另外两个实验动物质检单位的检测结果吻合度高达98％.②新鲜粪便与盲肠内容物中MNV的检出结果完全一致;24 h的陈旧粪便也能准确反映出该笼小鼠MNV的感染情况.③重庆市实验小鼠存在较高的MNV感染率,且封闭群和近交系小鼠MNV感染率无品系特异性(68.3％ vs.70.6％,x2=0.116,P=0.733),但基因修饰小鼠比普通小鼠更易感染MNV(78％ vs.64％,x2=6.434,P=0.011).④与正常对照组小鼠相比,BABL/c-nu小鼠自然感染MNV后肝、肺、脾和结肠均出现不同程度的炎症细胞浸润和明显的组织病理变化,且结肠组织的TNF-α、IFN-γ水平明显升高(F=21.682,P=0.002;F=77.223,P=0.000).结论:本研究建立的实时荧光定量PCR方法可靠,且可通过小鼠粪便样本,日常监测MNV的感染情况等;重庆市实验小鼠有较高的MNV感染率,且BABL/c-nu小鼠感染MNV会对动物实验结果造成干扰.因此,各实验动物单位应该重视MNV的传播和防控,加强实验动物的饲养管理,降低实验动物感染MNV的风险.