Survivin-shRNA 对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡影响相关研究﹡

目的：探讨 Survivin‐shRNA 对骨肉瘤 MG‐63细胞增殖活性、凋亡指数、超微结构变化以及 Survivin 、VEGF 、PCNA 及 CAS‐3蛋白表达水平的影响。方法：骨肉瘤 MG‐63细胞培养成功后，重组腺病毒 Survivin‐shRNA 转染。细胞以1∶5的比例进行稀释传代培养，挑选稳定转染的细胞并扩增培养用于进一步实验，Survivin‐shRNA 病毒载体转染的细胞为 Survivin‐shRNA 组，阴性对照为 GFP 组和 CON 组。采用 MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡指数，透射电镜观察细胞超微结构改变，Western blot 法检测 SUV 、VEGF 、PCNA 及 CAS‐3蛋白的表达变化。结果：腺病毒介导的 RNA 干扰构建 Survivin‐shRNA 载体，Survivin‐shRNA 组转染细胞的胞质及胞核可见绿色荧光，并伴有少量小颗粒物质。 MTT结果显示：Survivin‐shRNA 对 MG‐63细胞增殖有明显抑制作用；流式细胞仪检测结果发现：Survivin‐shRNA 组与 Control 组和 GFP 组相比，细胞早期凋亡率增加，可见核碎裂、凋亡小体；透射电镜可见 Survivin‐shRNA 对 MG‐63超微结构有明显作用，核固缩，微绒毛消失，染色质浓集靠近于核膜，并可见凋亡小体分离；Westtern blot分析显示：Survivin‐shRNA 抑制 SUV 、VEGF 和 PCNA 蛋白的表达，增强了 CAS‐3蛋白在 MG‐63细胞中的表达水平。结论：Survivin‐shRNA 可抑制骨肉瘤细胞增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成或通过调控 CAS‐3的表达、下调 SUV 信号通路来完成。